ISOLASI cDNA SUCROSE TRANSPORTER (SUT) DARI BATANG TANAMAN TEBU (Saccharum officinarum L.)
ABSTRAK: Sucrose Transporter
(SUT) merupakan protein transporter yang mengontrol translokasi sukrosa. Sukrosa transporter
adalah perantara dalam translokasi sukrosa dari apoplasmic ke simplasmic. SUT
memfasilitasi transport sukrosa dari
jaringan pembuluh ke sel-sel parenkim nodus batang tebu. Penelitian ini
bertujuan untuk mengisolasi cDNA SUT dari batang tebu, dan melakukan kloning ke
dalam E. coli strain DH5α. RNA total batang tebu diisolasi dengan metode single
step, kemudian ditambahkan oligo dT untuk memperoleh untai pertama cDNA SUT yang
akan digunakan sebagai template untuk PCR. Primer untuk PCR adalah 'att GTG
CTG-GGG tc-'3 (SUT-F) dan 5 gcc ATG' 5 CCT-TGC TCT ttg CCG GAA cc-'3 (SUT-R).
PCR diprogram sebagai berikut: denaturasi pada suhu 94 ° C selama 2 menit 30
detik, annealing pada 54 ° C selama 30 detik, ekstensi pada suhu 72 ° C 2 menit
dan 7 menit, dan penyimpanan pada 4 ° C selama waktu yang tak terbatas, program
tersebut dilakukan untuk 30 siklus. Komplemen SUT DNA dari PCR diligasi dengan
pTOPO-end bunt, kemudian dikloningkan dengan E. coli strain DH5α. Kloning yang
dihasilkan kemudian dihomologikan dengan pasangan nukleotida beberapa tanaman
menggunakan program BLASTn di BANK GEN NCBI dan diukur tingkat homologinya
dengan program Genetyx. Isolasi RNA total diperoleh konsentrasi 5.024 mg / ßl,
dengan kemurnian 1,85. Komplemen SUT fragmen DNA dari PCR dengan ukuran 2037 bp
sesuai dengan kedua primer yang digunakan. Komplemen fragmen DNA SUT
ditunjukkan oleh hasil analisis beberapa enzim restriksi misalnya EcoRI, PstI
dan BamHI. Fragmen cDNA SUT hasil isolasi dari batang tebu memiliki homologi 100%
dengan SoSUT 2a (AY165599.1) dan 84% dengan OsSUT (NM001052894.1) (Casu etal., 2003).
Penulis: Slameto, Bambang
Sugiharto
Kode Jurnal: jppertaniandd100136
