ISOLASI DAN KARAKTERISASI PROMOTER β-ACTIN DARI IKAN KERAPU BEBEK (Cromileptes altivelis)
Abstract: Promoter sebagai
regulator ekspresi gen merupakan salah satu faktor yang mempengaruhi
keberhasilan transgenesis. Penelitian
isolasi dan karakterisasi promoter β-actin (ktBA) dari ikan kerapu bebek
(Cromileptes altivelis) dalam rangka pembuatan ikan kerapu autotransgenik telah
dilakukan. Promoter β-actin memiliki aktivitas tinggi pada jaringan otot.
Sekuens promoter ktBA diisolasi menggunakan metode degenerate PCR. Sekuensing
dilakukan menggunakan mesin ABI PRISM 3100. Analisis sekuens menggunakan
software BLAST, GENETYX versi 7 dan TFBind. Fragment DNA hasil amplifikasi PCR
yang dipotong dari vektor kloning selanjutnya diligasi dengan pEGFPN1 untuk
membuat konstruksi pktBA-EGFP. Konstruksi pktBA-EGFP dimikroinjeksi ke embrio
ikan zebra (Danio rerio) fase 1 sel untuk menguji aktivitas promoter ktBA.
Ekspresi gen EGFP diamati menggunakan mikroskop fluoresens. Analisis sekuens
menunjukkan bahwa panjang fragmen DNA hasil amplifikasi PCR sekitar 1,6 kb dan
memiliki faktor transkripsi yang conserved pada promoter β-actin, yaitu CCAAT,
CArG dan boks TATA. Selanjutnya, sekuens ktBA dalam konstruksi pktBA-EGFP mampu
mengendalikan ekspresi gen EGFP pada jaringan otot embrio ikan zebra yang
dimikroinjeksi dengan konstruksi tersebut. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa
fragmen DNA hasil amplifikasi PCR tersebut merupakan sekuens promoter β-actin
ikan kerapu bebek. Pembuatan ikan kerapu autotransgenik selanjutnya dapat
dilakukan dengan mengganti gen EGFP pada pktBA-EGFP dengan gen-gen asal ikan
kerapu yang mengkodekan karakter penting dalam budi daya ikan.
Keywords: cloning; β -actin
promoter; autotransgenic; EGFP; Cromileptes altivelis; Danio rerio
Penulis: Alimuddin,
Wedaraningtyas Nugrahani, Ratu Siti Aliah, Komar Sumantadinata, Irvan Faizal,
Odang Carman, Goro Yoshizaki
Kode Jurnal: jpperikanandd070114
