Ekspresi Prethrombin-2 Manusia Recombinan dalamPichia pastoris dan Optimasi Kondisi Ekspresinya
Abstrak: Pretrombin merupakan
prekursor dari trombin yang memiliki aktivitas proteolitik. Trombin merubah
fibrinogen menjadi benang fibrin yang salah satu aplikasinya adalah dapat
digunakan sebagai lem untuk menggantikan teknik jahitan pasca bedah. Aplikasi
trombin untuk pembuatan lem fibrin menuntut diproduksinya trombin rekombinan.
Tujuan dari penelitian ini adalah ekspresi gen pretrombin-2 (PT2) manusia
rekombinan menggunakan sistem ekspresi Pichia pastoris. Gen pengode PT2
dirancang sesuai dengan kodon preferensi P. pastoris. Fragmen PT2 diamplifikasi
dengan metoda PCR dengan penambahan sisi restriksi EcoR1 pada ujung 5’ dan sisi
restriksi SacII pada ujung 3’. Produk PCR yang berukuran 924 pb diligasi dengan
vektor ekspresi pPICZaB untuk P. pastoris dan disubkloning dalam inang
Escherichia coli. Urutan nukleotida dikonfirmasi dengan metoda dideoxy Sanger.
Plasmid rekombinan pPICZaB-PT2 kemudian digunakan untuk mentransformasi P.
pastoris SMD1168 defisien protease dengan metoda elektroporasi. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa gen PT2 berhasil diamplifikasi dan dikloning dalam
E. coli. Analisis restriksi dan penentuan urutan DNA menunjukkan bahwa PT2
rekombinan 100% homologi dengan hasil rancangan. Hasil ekspresi PT2 oleh P.
pastoris menggunakan metanol sebagai inducer memperlihatkan bahwa PT2 dengan
berat molekul 35 kDa berhasil diekspresikan. Optimasi kondisi ekspresi melalui
variasi konsentrasi metanol sebagai inducer dan sorbitol sebagai sumber karbon
tambahan menunjukkan bahwa metanol 2% dan sorbitol 2% merupakan kondisi optimum
ekspresi PT2.
Kata kunci: Pretrombin-2, trombin, Pichia pastoris, kondisi ekspresi
Penulis: Shabarni Gaffar,
Purba Upay, Iman Permana Maksum, Khomaini Hasan, Toto Subroto, Sutarya Enus,
Soetijoso Soemitro, Wulan Pertiwi
Kode Jurnal: jpfarmasidd170584
