Spesifitas dan Sensitifitas Antibodi Anti eRF3 Ragi Saccharomyces cerevisia
Abstrak: Protein eRF3
(eukaryotic release factor-3) merupakan salah satu protein yang berperan pada proses
terminasi translasi. Protein ini bersama-sama dengan eRF1 (eukaryotic release
factor-1) saling berinteraksi membentuk kompleks release factor dalam memediasi
pelepasan rantai polipeptida dari ribosom. Untuk memahami mekanisme terminasi
translasi dalam sistem eukariot telah dilakukan studi struktur fungsi eRF1 yang
dilanjutkan dengan studi interaksi in vitro eRF1 mutan dan eRF1 wild type dengan
eRF3. Namun demikian, hasil deteksi dari studi interaksi in vitro sulit
terdeteksi secara kuantitatif. Untuk dapat mengkuantisasi pita-pita eRF3 hasil
studi interaksi in vitro diperlukan antibodi anti eRF3. Konstruksi antibodi
anti eRF3 telah dilakukan, tetapi antibodi ini belum terkarakterisasi dengan
baik. Tahapan selanjutnya dilakukan analisa Western blot dengan cara mengukur
tingkat spesifitas dan sensitifitas antibodi anti eRF3 terhadap protein eRF3.
Spesifitas antibodi ditentukan berdasarkan kemampuan antibodi ini dalam
mengenali epitop protein eRF3 dari berbagai protein yang terdapat pada crude
extract ragi, sedangkan sensitifitasnya ditentukan melalui variasi jumlah
antigen (eRF3) yang berinteraksi dengan antibodi tersebut. Hasil analisa Western
blot menunjukkan spesifitas antibodi anti eRF3 masih relatif baik dimana
antibodi ini mampu mengenali epitop protein eRF3 yang ditandai dengan munculnya
pita tunggal (76,6 kDa) setelah antibodi ini direaksikan dengan crude extract
ragi yang mengandung protein eRF3. Sensitifitas antibodi ini juga relatif
tinggi, karena antibodi ini mampu mendeteksi protein eRF3 hingga jumlah yang
relatif rendah (0,77 ng). Namun demikian antibodi ini belum cukup mampu
mendeteksi protein eRF3 yang secara alamiah terdapat pada crude extract ragi.
Hal ini kemungkinan besar disebabkan karena level ekspresi eRF3 dalam sel ragi
yang relatif rendah jika dibandingkan dengan protein ribosom.
Penulis: Sandra Hermanto
Kode Jurnal: jpkimiadd070032
