EKSPRESI PROTEIN COAT DAN mRNA VIRAL NERVOUS NECROSIS YANG DIKENDALIKAN OLEH PROMOTER β-AKTIN IKAN MEDAKA DAN KERATIN IKAN FLOUNDER JEPANG
Abstract: Kemampuan promoter
dalam mengatur ekspresi gen penyandi protein imunogenik sangat menentukan
efikasi suatu vaksin DNA. Penelitian ini bertujuan untuk mengukur tingkat
ekspresi protein dan mRNA RNA2 penyandi coat protein (CP) virus viral nervous
necrosis (VNN) yang dikendalikan oleh dua promoter berbeda, yaitu promoter
β-aktin ikan medaka (mBA), dan keratin ikan flounder Jepang (JfKer). Uji
ekspresi CP dilakukan menggunakan embrio ikan lele dumbo (Clarias sp.) sebagai
model, sedangkan analisis mRNA dilakukan menggunakan ikan kerapu tikus.
Konstruksi vektor ekspresi pmBA-CP dan pJKer-CP dengan konsentrasi 50 ng/μL KCl
1 M disuntikkan ke embrio ikan lele dumbo fase 1-2 sel. Sebanyak 30 embrio ikan
lele dumbo diambil pada jam ke-6, 8, 10, 12, 14, dan 16 pascainjeksi untuk
analisis protein. Hasil SDS-PAGE menunjukkan adanya protein berukuran sekitar
42 kDa, dan analisis western blot menggunakan antibodi (Ab) poliklonal anti-VNN
membuktikan bahwa protein tersebut adalah CP. Keberhasilan deteksi protein
spesifik menggunakan Ab anti-VNN tersebut menunjukkan bahwa embrio ikan lele
dapat digunakan untuk menguji potensi produksi protein imunogenik yang
dikendalikan oleh promoter berbeda. Pengujian ini juga menunjukkan bahwa,
aktivitas promoter mBA lebih tinggi daripada promoter JfKer, sehingga uji
ekspresi mRNA dilakukan menggunakan konstruksi pmBA-CP. Benih ikan kerapu tikus
(panjang badan sekitar 5 cm) diinjeksi dengan pmBA-CP secara intramuskular
dengan dosis 12,5 μg/ekor. Total RNA diekstraksi dari daging pada waktu 6, 12,
dan 24 jam pascainjeksi. Hasil RT-PCR menunjukkan adanya ekspresi mRNA CP pada
24 jam pascainjeksi. Hal tersebut menunjukkan bahwa promotor mBA aktif
mengendalikan ekspresi CP pada ikan kerapu tikus, dan pmBA-CP berpotensi
digunakan sebagai vaksin DNA untuk menginduksi kekebalan ikan kerapu terhadap
infeksi VNN.
Keywords: protein coat; mRNA;
viral nervous necrosis; promoter
Penulis: Wiwien Mukti Andriyani,
Sri Murtini, Alimuddin, I.W. Teguh Wibawan
Kode Jurnal: jpperikanandd140345
